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當(dāng)前位置: 首頁 > 行業(yè)資訊 > EBV-轉(zhuǎn)化人淋巴細(xì)胞

EBV-轉(zhuǎn)化人淋巴細(xì)胞

 一、細(xì)胞培養(yǎng)條件

細(xì)胞英文名稱:CAM191

細(xì)胞中文名稱:EBV-轉(zhuǎn)化人淋巴細(xì)胞

形態(tài)特性:淋巴母細(xì)胞樣

生長(zhǎng)特性:懸浮

培養(yǎng)體系:1640+10%FBS

傳代方法:傳代情況

凍存條件:細(xì)胞庫無血清凍存液

二、細(xì)胞收到后處理

細(xì)胞在培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)至良好狀態(tài)后灌滿完全培養(yǎng)液并封好瓶口是細(xì)胞運(yùn)輸?shù)淖?/font>

好辦法。收到細(xì)胞回到自己的實(shí)驗(yàn)室后,先打開外包裝,用 75%酒精噴灑整個(gè)瓶

消毒后放到超凈臺(tái)內(nèi),嚴(yán)格無菌操作。鏡下觀察:未超過 80%匯合度時(shí),可將瓶

裝的完全培養(yǎng)液移入廢液缸中,懸浮細(xì)胞需離心處理,加入 6ml 新鮮完全培養(yǎng)基,

放入 37℃、5%CO2 孵箱培養(yǎng);超過 80%匯合度時(shí),根據(jù)情況傳代或者凍存,具體

操作見細(xì)胞培養(yǎng)步驟。

三、細(xì)胞培養(yǎng)步驟

1)復(fù)蘇細(xì)胞:將含有 1mL 細(xì)胞懸液的凍存管在 37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入

5mL 培養(yǎng)基混合均勻。在 1000RPM 條件下離心 5 分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL

培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或?qū)⒓?xì)胞懸液加入

6cm 皿中,加入約 6ml 培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

2)細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá) 80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。1、對(duì)于懸浮細(xì)胞,傳代可參考以下方法:

方法一:收集細(xì)胞,1000RPM 條件下離心 8-10 分鐘,棄去上清液,補(bǔ)加 1-2mL

培養(yǎng)液后吹勻,將細(xì)胞懸液按 1:2 到 1:5 的比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿

中或者瓶中。

方法二:可選擇半數(shù)換液方式,棄去半數(shù)培養(yǎng)基后,將剩余細(xì)胞懸起,將細(xì)胞懸

液按 1:2 到 1:3 的比例分到新的含 8ml 培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

3)細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。貼壁細(xì)胞凍存時(shí),棄

去培養(yǎng)基后加入少量胰酶,細(xì)胞變圓脫落后,進(jìn)行離心收集,1000RPM 條件下離

8-10 分鐘,去除上清,按凍存數(shù)量加入細(xì)胞庫推薦的無血清凍存液。

PS若客戶收到 2ml 小管細(xì)胞,收到細(xì)胞后,用 75%酒精噴灑整個(gè)管子消毒后放

到超凈臺(tái)或安全柜內(nèi),嚴(yán)格無菌操作;將小管細(xì)胞轉(zhuǎn)移至 T25 培養(yǎng)瓶或 6cm

養(yǎng)皿,加入 5ml 左右完全培養(yǎng)基混勻,放入培養(yǎng)箱過夜培養(yǎng)后查看細(xì)胞密度:若

密度未超過 80%,換液繼續(xù)培養(yǎng),視情況傳代或者凍存。若密度超過 80%,可直

接進(jìn)行傳代(方法同上)。

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